Окрашивание по Граму

Каждый студент и специалист, работающий с бактериями, должен в какой-то момент научиться делать окраску по Граму. Окрашивание по Граму представляет собой процедуру окрашивания, используемую не только для того, чтобы сделать бактериальные клетки более видимыми под микроскопом, но также для дифференциации типов клеток на основе состава клеточной стенки.

Лучший способ оценить, как окраска Грама способна дифференцировать бактерии на основе их клеточных стенок, - это погрузиться прямо в сам процесс.

Грамположительные клетки выглядят фиолетовыми, а грамотрицательные клетки - красными после правильного окрашивания. Прежде всего необходимо подготовить бактериальный образец.

Бактерии должны быть старше 24 часов, чтобы обеспечить точные результаты. Бактерии нужно распределить тонким слоем по предметному стеклу микроскопа. Тонкий слой обеспечит равномерное и полное окрашивание. После нанесения на предметное стекло бактерии необходимо зафиксировать теплом, размахивая дном предметного стекла над открытым пламенем. Слайд должен нагреваться, но не нагреваться. Слишком много тепла может исказить клетки или даже разбить предметное стекло. Мягкое нагревание убьет бактерии и прикрепит их к предметному стеклу, чтобы их нельзя было легко смыть.

1: Покрыть поверхность предметного стекла кристаллическим фиолетовым в течение одной минуты. Кристаллический фиолетовый является основным пятном. Это окрасит бактерии темно-фиолетового цвета. Кристаллический фиолетовый проникает сквозь клеточные стенки всех бактерий, делая их все под пурпуром под микроскопом.

2: Осторожно смыть пятно с предметного стекла. Этого легче всего добиться, наклонив предметное стекло под слегка работающим краном и промывая обычной водой, пока вода не станет чистой. Избыток кристаллического фиолетового будет стекать в раковину, а пятно, проникшее в стенки клеток, останется.

3: Покрыть слайд йодом Грама на одну минуту. Йод Грама служит протравой. Морилка - это вещество, которое сочетается с красителем или красителем для усиления окрашивания. Йод образует плотный комплекс с кристаллическим фиолетовым, образуя соединения большего размера. Этот больший размер помогает кристаллическому фиолетовому сопротивляться ополаскиванию из клеточных стенок во время последующих стадий ополаскивания.

4: Осторожно промыть йод Грамма с горки. Та же самая промывка из-под крана работает и здесь. В этот момент, если посмотреть на предметное стекло под микроскопом, все клетки все еще будут выглядеть фиолетовыми от пятна кристаллического фиолетового.

5: Обесцвечивание предметного стекла 95% этанолом. Необходимо слегка наклонить предметное стекло и медленно потекут обесцвечивающим этанолом. Видно, что обесцвечивающее вещество подхватывает фиолетовое пятно, когда оно проходит через клетки. Важно прекратить обесцвечивание, как только обесцвечиватель станет чистым, убегая от предметного стекла.

Видео обзор

Окраска по Граму: методика и реагенты

Приготовление фиксированного мазка и окраска по Граму

Сложные методы окраски. Окраска по Граму

Микробиология.Методы краски: Метод Грама .

4. Окраска по Граму